Prof. Dr. Ioan Petre Florescu
Directorul de Proiect:
Prof. Dr. Ioan Petre Florescu
vezi profil

Obiectivul general

   al proiectului nostru este reprezentat de elaborarea si dezvoltarea unei metode terapeutice alternative de regenerare nervoasa periferica, prin utilizarea unui suport celular constand din CN si MSC transdiferentiate Schwann-like si standardizarea ei conform normelor bioetice.
Rezultatele S/T estimate:
  1. verificarea, testarea si evaluarea metodei terapeutice alternative de reparare microchirurgicala a defectelor nervoase periferice prin utilizarea de CN asociate cu MSC transdiferentiate Schwann-like. Standardizarea metodei conform normelor bioetice
  2. crearea premizelor pentru o noua forma de tratament a pacientilor cu leziuni nervoase periferice
  3. obtinerea unor metode optime de izolare si cultivare a MSC din maduva osoasa de sobolan si a tehnicilor optime de inducere a fenotipurilor neuronale
  4. obtinerea unor CN performante pe baza de polimeri naturali si sintetici biodegradabili
  5. comunicarea si publicarea rezultatelor in periodice stiintifice cu larga vizibilitate (cotate ISI)
  6. cresterea capacitatii de integrare in retele europene de cercetare precum Programul European FP7
  7. intocmirea documentatiei in vederea brevetarii metodei terapeutice alternative propuse
Etapa II: Realizarea in laborator de CN si testarea lor pe modele experimentale in vitro
In urma finalizarii acestei etape putem concluziona ca:
  • S-au obtinut CN prin amestecarea polimerilor sintetici alcool polivinilic (PVA), polietilenglicol (PEG) si policlorura de vinil (PVC) cu polimeri naturali (colagen tip I nedenaturat, hidrolizat de colagen si chitosan). S-a stabilit raportul optim de amestecare a acestor polimeri.
  • Amestecurile conditionate sub forma de membrane au fost testate din punct de vedere al biocompatibilitatii si s-au selectat variantele de amestecuri de polimeri care sunt cele mai biocompatibile cu scopul obtinerii de conducte nervoase si anume:
    • amestecul de PVA: hidrolizat de colagen in raportul de combinare de 9:1
    • amestecul de PVA: colagen nedenaturat in raportul de combinare de 1:1
    • amestecul de PEG: colagen nedenaturat in raportul de combinare de 1:1
    • amestecul de PVA: chitosan in raportul de combinare de 2:3
    • amestecul de PVC: hidrolizat de colagen in raport de combinare 2,33:1
  • Celulele stem s-au izolat din tesut adipos uman si s-au caracterizat din punct de vedere morfo-functional. S-a demonstrat ca celulele obtinute prezinta fenotip de celule stem mezenchimale (MSC), iar digestia enzimatica cu colagenaza este o metoda simpla si productiva de obtinere a MSC din lipoaspirat.
  • Acest model de izolare a MSC umane prezinta o serie de avantaje: limiteaza aspectele etice pentru obtinerea probelor biologice si exista o disponibilitate mai mare de tesut din interventiile chirurgicale (liposuctie).
  • Conductele nervoase biopolimerice obtinute reprezinta suporturi adecvate pentru inglobarea MSC in vederea testarii acestora pentru regenerarea nervilor periferici.
  • Studiile imunohistochimice au indicat ca celulele adipoase izolate au prezentat markeri specifici celulelor stem mezenchimale, de tipul Stro-1, CD44 si CD105.
  • Conductele nervoase PVAM – Colagen 1:1, PVAM – Hidrolizat de colagen 9:1, PVAM – Chitosan 4:6 si PEG – Colagen 1:1 au prezentat o buna biocompatibilitate demonstrata prin aderenta pe suprafata lor a celulelor stem mezenchimale care au pastrat o morfologie normala dupa 6 zile de cultivare.
  • Dintre cele patru conducte nervoase, cea mai buna biocompatibilitate a avut conductul PVAM – Chitosan 4:6, urmat de PVAM – Hidrolizat de colagen 9:1, PVAM – Colagen 1:1 si PEG – Colagen 1:1.
  • Analizele imunocitochimice au demonstrat ca celulele stem mezenchimale nu sufera apoptoza in prezenta celor patru tipuri de conducte nervoase. Celulele stem mezenchimale nu au prezentat reactie imunohistochimica pozitiva pentru proteinele apoptotice caspaza 8, caspaza 9, AIF, APAF-1 si BAX, in timp ce caspaza 3 a fost exprimata de un numar extrem de redus de celule.
  • Datele au fost centralizate si integrate de catre SCUBA, coordonatorul proiectului, in raportul intermediar de activitate.

Analiza imunofenotipica prin citometrie in flux a MSC umane izolate prin digestie enzimatica din os spongios

Analiza imunofenotipica prin citometrie in flux a MSC umane izolate prin digestie enzimatica din os spongios.


Membrana realizata prin uscarea amestecurilor de polimeri. Se observa ca membranele sunt transparente, elastice si flexibile

Membrana realizata prin uscarea amestecurilor de polimeri. Se observa ca membranele sunt transparente, elastice si flexibile.